Биологический факультет СПбГУ

биофак СПбГУ


Прозоровская Екатерина Львовна

Квалификационная работа магистра: "Сравнительный анализ экспрессии корецепторов CD28 и CD152 на тимоцитах разных стадий созревания"

Аннотация: На данный момент одним из актуальных вопросов иммунологии является процесс созревания и дифференцировки Т-лимфоцитов в тимусе. Для исследования этих событий в большинстве случаев используют гистологические методы, которые не показывают полной картины данных процессов. Так как изменение фенотипа в процессе созревания и дифференцировки играет ключевую роль в дальнейшей судьбе клетки, все современные исследования основаны на иммунофенотипировании тимоцитов. Также для понимания физиологических процессов происходящих в тимусе применяются модели иммунизации, основанные на введении разных антигенов. Особенно острым остается вопрос о вовлечении тимуса в иммунный ответ и способности тимоцитов к пролиферации в ответ на введение антигена.
Как известно еще с 1970-х гг для активации Т-клеток и запуска иммунного ответа не достаточно одного сигнала от Т-клеточного рецепторного комплекса и необходим второй сигнал от костимулирующих молекул, главным образом CD28. Открытая позднее костимулирующая молекула CD152 работает как антагонист CD28 и до сих пор остается неизученной. Учитывая литературные данные о функциях этих костимулирующих молекул, а также данные об уровнях их экспрессии на тимоцитах разных стадий созревания в ответ на иммунизацию, можно получить представления о физиологических процессах, происходящих в тимусе. В работе впервые проведена оценка уровней экспрессии CD28 и CD152 методом проточной цитометрии на тимоцитах разных стадий созревания в ответ на иммунизацию различными антигенами. В ходе экспериментов установлены высокие уровни экспрессии CD152 в ответ на иммунизацию ЛПС, что прежде не было описано в литературе. Была показана динамика изменений объемов популяций тимоцитов и уровней экспрессии CD28 и CD152 в ответ на иммунизацию БСА и комбинацией декстран + БСА, что также не описано в литературе.


Направление: Биология

Кафедра: Цитологии и гистологии

Научный руководитель: д.б.н. Полевщиков А. В.

Отзыв научного руководителя

Рецензент: д.м.н. Н.Б. Серебряная

Рецензия 

Тимус – центральный орган иммунной системы, работа которого все еще изучена недостаточно. Одним из актуальных нерешенных вопросов является процесс созревания и дифференцировки Т-лимфоцитов в тимусе, его зависимость или независимость от антигенных вызовов, поступающих с периферии. Для исследования этих событий, происходящих в тимусе, традиционно используют молекулярно-генетические, гистологические методы, которые не воссоздают полной картины указанных процессов. Современные исследования иммунофенотипа тимоцитов в процессе их созревания и дифференцировки показали связь фенотипа с функцией этих клеток. Однако все еще нет полного представления о всех экспрессируемых на тимоцитах молекулах.
С 70-х гг ХХ века известно, что для активации Т-клеток и запуска иммунного ответа недостаточно одного сигнала от Т-клеточного рецепторного комплекса и необходим второй активационный сигнал от костимулирующих молекул, главным образом CD28. Другая костимулирующая молекула -  CD152 - создает ингибиторный сигнал при взаимодействии Т-лимфоцитов с антигенпрезентирующими клетками. Сведений об экспрессии ко-стимулирующих молекул на тимоцитах почти нет. Не известно и задействованы ли костимулирующие сигналы в развитии тимоцитов и если да, то в каких физиологических процессах. Для понимания процессов, происходящих в тимусе, удобными являются модели иммунизации, основанные на введении разных антигенов. В условиях иммунизации и последующего иммунного ответа можно проследить, вовлекается ли тимус в иммунный ответ и способны ли тимоциты к пролиферации в ответ на введение антигена. В частности, появление костимулирующих молекул на тимоцитах разных стадий созревания в ходе иммунного ответа может дать дополнительную информацию о физиологических процессах, происходящих в тимусе.
Таким образом, магистерская диссертационная работа Прозоровской Екатерины Львовны, нацеленная анализ экспрессии корецепторов CD28 и CD152 на тимоцитах разных стадий созревания является актуальной и направленной на определение процессов, происходящих в тимусе.
Для достижения этой цели   на материале 60 животных автором был оценен объем популяций тимоцитов интактных мышей и изменения объема в ответ на введение антигена, в том числе уровень экспрессии CD28 и CD152на тимоцитах интактных животных и животных после введения иммунизации.  Иммунофенотип тимоцитов разных стадий созревания в ответ на иммунизацию различными антигенами определялся методом проточной цитометрии. Все полученные результаты подвергнуты корректной статистический обработке. То есть, работа проведена с использованием современных методов исследования, полностью соответствующих целям работы, на достаточном материале. Представленные в тексте собственные данные позволяют судить о том, что все исследования проведены на должном высоком уровне, и полученные результаты являются достоверными.
Магистерская диссертационная работа Прозоровской Е.Л. построена по традиционному плану и содержит введение, обзор литературы, главы, посвященные описанию материалов и методов исследования, полученных результатов и их обсуждение. Работа изложена на 75 страницах, содержит 27 таблиц и 14 рисунков. Библиографический указатель содержит 85 источников, как «классических», так и самых современных.
Представленный автором обзор литературы с достаточной полнотой анализирует имеющиеся на сегодняшний день данные о созревание и дифференцировка тимоцитов, особенностях антигенов CD28 и CD152, их экспрессии и связи с процессами, протекающими в лимфоцитах.
Проведенные эксперименты позволили определить уровни экспрессии CD28 и CD152 на разных популяциях тимоцитов, в том числе DN (DN1, DN2, DN3, DN4), DP, SP (CD4+ или CD8+) в ходе иммунных ответов на разные антигены и вариантные режимы иммунизации. Установлены высокие уровни экспрессии CD152 в ответ на иммунизацию ЛПС. Показана динамика изменений объемов популяций тимоцитов и уровней экспрессии CD28 и CD152 в ответ на иммунизацию БСА и комбинацией декстран + БСА. Полученные результаты являются новыми и выявляют новые, дополнительные типы процессов, в которых вовлекаются тимоциты в тимусе в процессе развития.
Полученные автором результаты обсуждены, сопоставлены с данными литературы, что позволило автору сформулировать гипотезу о наличии, наличие антиген-зависимого этапа созревания Т-лимфоцитов, протекающего в тимусе.
Работа заканчивается 4 выводами, логично вытекающими из основных материалов диссертации. Все выводы диссертации логично вытекают из глубокого анализа и обобщения результатов исследования и поэтому не вызывают возражений. В целом, работа хорошо оформлена, опечаток и грамматических ошибок в работе мало. Принципиальных замечаний к работе нет.
 Таким образом, магистерская диссертация Прозоровской Екатерины Львовны отвечает всем требованиям, предъявляемым ГАК, и может быть оценена как «отличная», а её автор заслуживает присвоения степени магистра по избранной специальности.

Дата защиты: 09-06-2015



© Биологический факультет СПбГУ, 2006-2011