Биологический факультет СПбГУ

Магистерские дипломы




Старская Инна Сергеевна

Квалификационная работа магистра: "Стресс-индуцированная атрофия тимуса: морфологический анализ и динамика процесса"

Аннотация: Хотя начало изучения стресс-индуцированной атрофии тимуса было положено работами Г. Селье еще в 1930 году, механизмы и биологическое значение этого явления до сих пор не до конца ясны. Особый интерес в изучении иммунобиологии тимуса представляет чувствительность органа к воздействию различных токсических, стрессорных факторов и старению. Однако в отличие от возрастной инволюции, стресс-индуцированная атрофия сопровождается последующим восстановлением тимуса после отмены действия стресс-фактора. Не менее интересным аспектом изучения атрофии тимуса является и процесс восстановления органа. Целью работы явилось изучение процесса стресс-индуцированной атрофии тимуса в сопоставлении результатов гистологического исследования и проточной цитометрии. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Отработка модели стресс-индуцированной атрофии на основании морфометрических исследований; 2. Изучение гистологических изменений в тимусе при стресс-индуцированной атрофии тимуса, индуцированной введением гидрокортизона на протяжении 96 ч после введения препарата; 3. Оценка уровня раннего и позднего апоптоза в тимусе в ходе стресс-индуцированной атрофии тимуса; 4. Оценка динамики основных популяций тимоцитов в ходе стресс-индуцированной атрофии тимуса. В качестве объекта исследования использованы нелинейные белые мыши-самцы, приблизительный возраст которых составил 6-8 недель. Для анализа динамики процесса животных умерщвляли через 12, 24, 48, 72, 96 ч с момента введения препаратов методом цервикальной дислокации и извлекали тимус для исследования. ВЫВОДЫ 1. Результатом введения мышам 2,5 мг гидрокортизона является сокращение массы тимуса на 80,35% через 96 ч после введения препарата. Параллельно уменьшаются линейные размеры органа. 2. Через 12 ч после введения 2.5 мг гидрокортизона в тимусе мышей наблюдается максимальное количество апоптотических телец, которое сокращается к 24 ч и исчезает к 48 ч. 3. Уже через 48 ч после введения 2,5 мг гидрокортизона на фоне элиминации апоптотических телец в корковом веществе появлялись пролиферирующие клетки. 4. Цитометрическая оценка уровня апоптоза выявила максимальный уровень раннего и позднего апоптоза в точке 12 ч после введения 2,5 мг гидрокортизона. Максимальный уровень раннего апоптоза составил 30,58%, позднего апоптоза – 25, 46%. Начиная с точки 48 ч после введения гидрокортизона, уровень раннего и позднего апоптоза не отличался от контрольной группы. 5. Наиболее чувствительной к введению гидрокортизона оказалась популяция незрелых DP (CD4+CD8+) клеток, содержание которых в тимусе сократилось на 88,08% через 96 ч после введения препарата.

Направление: Биология

Кафедра: Цитологии и Гистологии

Научный руководитель: Полевщиков А. В. , доктор биологических наук

Дата защиты: 14-06-2012

Отзыв о магистранте: Моё руководство научной работой И.С.Старской началось осенью 2010 года, после её поступления в магистратуру каф. цитологии и гистологии. Сам факт поступления в магистратуру с выбором темы научной работы в области иммунологии уже был мужественным поступком со стороны И.С.Старской, окончившей бакалавриат биолого-почвенного факультета свыше 5 лет назад по специальности «почвоведение». Тем большее впечатление произвела на меня работа И.С.Старской по подготовке магистерской диссертации в период 2010-2012 гг. За весьма короткий срок она освоила целый спектр совершенно новых для неё методик, включая гистологическую технику, проточную цитометрию, методы оценки апоптоза и собственно иммунологические методы. Но главным достижением И.С.Старской стало освоение иммунологической теории, глубокое и неформальное изучение иммунобиологии тимуса, методологии иммунологических исследований. Её отличает аналитический склад мышления, способность к критическому анализу проблемы, объективный и неформальный подход к поставленной задаче. Этому в немалой степени способствует отличное знание английского языка, громадная работоспособность, умение не разделять исследовательскую и черновую работу, а также замечательные человеческие качества, неконфликтность и умение работать в коллективе, умение слушать советы и помогать ближним. Особенно отрадно, что результатом исследовательской работы И.С.Старской стало проведение всей работы лично, своими руками. Также лично была подготовлена и рукопись магистерской диссертации, как и первые самостоятельные публикации по теме проекта. Кстати, по ходу совместной работы претерпел существенное улучшение и совершенствование собственный стиль научного изложения, способность к обобщению научных данных и анализу полученных результатов. Отмеченных моменты стали основанием для принятия И.С.Старской на научную ставку в отделе иммунологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, а также утверждения в феврале 2012 г. темы её дальнейшей кандидатской диссертации, которая, как предполагается, станет продолжением и развитием работы в рамках магистерской диссертации. Не сомневаюсь в том, что в лице И.С.Старской мы имеем дело с молодым безусловно талантливым, мотивированным на научную работу молодым специалистом, научный потенциал которого очень велик и будет раскрываться в ходе дальнейшей научной работы, для занятия которой есть все основания и в успехе которой я как руководитель не сомневаюсь.

Рецензент: Серебряная Н. Б., доктор медицинских наук

Рецензия: Тимус – центральный орган иммунной системы, открытие иммунной функции которого стало краеугольным камнем в фундаменте современной («неинфекционной») иммунологии. Однако тимус очень медленно и малыми порциями раскрывает перед исследователями тайны своей работы. Так, до середины 70-х годов прошлого века основное внимание исследователей было приковано к эндокринной функции тимуса. Позднее, после внедрения молекулярно-генетических методов, когда стало возможно изучение генов Т-клеточного рецептора, произошло существенное продвижение в понимании этапов развития Т-клеток в тимусе и особенностей их селекции. Исследования последних десятилетий показали существенно большее многообразие клеточных линий, формирующихся в тимусе, чем это представлялось ранее. В связи с изложенным, магистерская диссертации Старской Инны Сергеевны, направленная изучение морфологических изменений и их динамики в процессе стресс-индуцированной атрофии тимуса, является чрезвычайно актуальной. Для достижения поставленной цели автор отработала модель стресс-индуцированной атрофии, вызванной введением гидрокортизона. Диссертант самостоятельно проводила морфометрические и гистологические исследования, определяла уровни раннего и позднего апоптоза в тимусе и оценивала динамику основных популяций тимоцитов в ходе стресс-индуцированной атрофии. Все результаты подвергнуты корректной статистический обработке, так же проведенной лично автором. То есть, работа проведена с использованием современных методов исследования, полностью соответствующих целям работы, на достаточном материале. Представленные в тексте собственные данные позволяют судить о том, что все исследования проведены на должном высоком уровне, и полученные результаты являются достоверными. В обзоре литературы автор на материале 131 публикации – как «классических», так и самых современных - с исчерпывающей глубиной раскрывает эмбриогенез тимуса, его нормальную анатомия и гистологию, описывает картину возрастной инволюции и стресс-индуцированной атрофии, восстановление тимуса после атрофии, а также механизмы стресс-индуцированной атрофии. Обращает на себя внимание крайняя немногочисленность исследований отечественных авторов по данному вопросу (только 2 профильные публикации!). Особую привлекательность обзору придает попытка автора раскрыть биологический смысл стресс-индуцированной атрофии тимуса. Проведенные автором эксперименты позволили выявить сокращение массы (более чем на 80%) и размеров тимуса через 96 ч после фармакологической имитации стресса. Максимальное количество апоптотических телец выявлялось через 12 ч после введения гидрокортизона, и сокращалось к 24 ч, исчезая к 48 ч. В ходе стресс-индуцированной атрофии наблюдали инфильтрацию тимуса нейтрофилами и появление апоптотических телец в корковом и в мозговом веществе и уменьшение численности тимоцитов на ~ 30%. Наиболее чувствительной к гидрокортизону оказалась субпопуляция незрелых DP (CD4+CD8+) клеток, содержание которых в тимусе сократилось на 88,08% через 96 ч после введения препарата. Возобновление пролиферации тимоцитов происходило через 48 ч после имитации стресса и сопровождалось расширением микроциркуляторного русла. Представленные материалы обильно иллюстрированы микрофотографиями прекрасного качества, рисунками и графиками. Полученные данные автор анализирует и осысливает в разделе "Обсуждение ". Работа заканчивается 5 выводами, логично вытекающими из основных материалов диссертации. Все выводы диссертации логично вытекают из глубокого анализа и обобщения результатов исследования и поэтому не вызывают возражений. Диссертационная работа хорошо оформлена, число опечаток невелико. В целом, работа убедительна, интересно задумана и тщательно выполнена. Таким образом, магистерская диссертация Старской Инны Сергеевны отвечает всем требованиям, предъявляемым ГАК, и может быть оценена как «отличная», а её автор заслуживает присвоения степени магистра по избранной специальности.



© Биологический факультет СПбГУ, 2006-2011