Филиппова Елизавета Андреевна
Квалификационная работа магистра: "Влияние ингибиторов HDAC на чувствительность трансформированных клеток к действию цитотоксических агентов"
Аннотация: Ингибиторы гистоновых деацетилаз (HDACi) представляют собой новый класс потенциальных противоопухолевых агентов благодаря их способности избирательно подавлять пролиферацию трансформированных клеток, действуя в дозах, нетоксичных для нормальных клеток. Они способствуют ацетилированию гистонов, что приводит к деконденсации хроматина и активации транскрипции ряда генов, вовлеченных в регуляцию клеточного цикла, дифференцировку, апоптоз и иммунный ответ. Последние данные свидетельствуют о том, что HDACi могут модулировать сигнальные пути, контролирующие ответ клетки на действие ДНК-повреждающих агентов и различных стресс-факторов, тем самым повышая чувствительность клетки к действию цитостатиков. Поэтому весьма перспективным представляется комбинированное использование HDACi и различных цитостатических агентов для более эффективного подавления развития опухолей или индукции в них апоптоза. Однако, в настоящее время, точные механизмы, с помощью которых HDACi оказывают подобный эффект на трансформированные клетки, остаются невыясненными.
Была исследована возможность сенсибилизации ингибитором HDAC бутиратом натрия (NaB) трансформированных клеток к действию различных цитотоксических агентов, используемых в терапии рака. Для этого были использованы агенты, нацеленные на различные фазы клеточного цикла - ингибиторы полимеризации микротрубочек (колцемид, таксол), тормозящие пролиферацию на стадии митоза, ингибитор топоизомеразы II этопозид, приводящий к ингибированию перехода S/G2, а также днк-интеркаллятор актиномицин, препятствующий репликации и транскрипции.
Оценка выживаемости клеток, проводимая с помощью МТТ-анализа, показала, что NaB способствует повышению чувствительности онкоген-трансформированных клеток E1A+Ras к действию всех исследованных цитотоксических агентов, кроме актиномицина, цитостатическое действие которого снижалось. В гистограммах FACS анализа определялось увеличение субдиплоидного пика при совместном действии таксола, колцемида и этопозида с NaB, что указывает на возможную индукцию апоптоза. При этом NaB не вызывал усиления апоптотической гибели в клетках, обработанных актиномицином. Однако совместное действие NaB со всеми цитостатическими агентами приводило к сильному подавлению клоногенной выживаемости трансформированных клеток. Стоит отметить, что использованные концентрации актиномицина приводили к аддитивному эффекту, т.е. отсутствовало влияние одного вещества на характер действия другого. При этом синергичный эффект наблюдался при комбинированном действии таксола, колцемида и этопозида с NaB. Также комбинированное использование колцемида с NaB вызывало активацию проапоптотических путей в трансформированных клетках, в том числе накопление активной каспазы-3, что говорит о запуске каспаз-зависимого апоптоза, однако в клетках обработанных этопозидом, NaB приводил к падению уровня каспазы. Это может свидетельствовать о каспаз-независимом апоптозе в трансформированных клетках.
Направление: Биология
Кафедра: Цитологии и гистологии
Научный руководитель: к.б.н. М.В. Иготти
Отзыв научного руководителя
Рецензент: к.б.н. Д.Г.Тентлер
Рецензия
Дата защиты: 10-06-2015
|
