Гнедина Ольга Олеговна
Квалификационная работа магистра: "Влияние ингибиторов HDAC на репарацию ДНК в нормальных и трансформированных клетках"
Аннотация: В терапии онкологических заболеваний применяют жесткие цитотоксические воздействия – облучение, химиотерапия – однако чаще всего негативный эффект на здоровые клетки сильно превышает ожидаемый эффект на раковые клетки из-за усиленной работы систем репарации в трансформированных клетках. Поэтому необходим поиск агентов, угнетающих ключевых игроков процесса восстановления повреждений ДНК, что должно привести раковые клетки к гибели. Исследования влияния ингибиторов гистоновых деацетилаз (HDAC) на пролиферацию трансформированных клеток показали, что их применение вызывает остановку клеточного цикла в фазах G1 или апоптоз. Изучение действия ингибиторов HDAC на трансформированные клетки представляет особый интерес, поскольку они способны останавливать пролиферацию некоторых опухолевых клеток в дозах, нетоксичных для нормальных клеток, что может иметь широкие перспективы в клинической терапии опухолей. Для выяснения особенностей совместного влияния на раковые клетки ингибиторов HDAC и ДНК-повреждающих агентов, важной задачей является понять, как влияет ингибирование HDAC на повреждение ДНК в трансформированных клетках. Ранее было показано, что ингибитор HDAC бутират натрия (NaBut) способствует накоплению фосфорилированной формы гистона H2AX в трансформированных клетках, что является важным маркером двунитевых разрывов ДНК. Поэтому целью работы являлось исследовать влияние ингибитора HDAC бутирата натрия на репарацию ДНК в онкоген-трансформированных клетках. Работа велась на линии онкоген-трансформированных эмбриональных фибробластов мыши mERas. Были поставлены задачи изучить влияние ингибитора HDAC бутирата натрия на репарацию ДНК после воздействия ДНК-повреждающего агента этопозида в нормальных и трансформированных клетках; сравнить влияние бутирата натрия на репарацию двунитевых разрывов ДНК по механизмам негомологичного соединения концов (NHEJ), гомологичной рекомбинации (HR) и эксцизионной репарации нуклеотидов (NER) в нормальных и трансформированных клетках; а также исследовать влияние бутирата натрия на экспрессию генов, кодирующих белки репарации ДНК, в нормальных и трансформированных клетках. В исследовании использовался метод комет и метод реактивации транскрипции люциферазы. Обнаружено, что действие бутирата натрия приводит к снижению эффективности репарации ДНК после воздействия ДНК-повреждающего агента в трансформированных клетках, но не в нормальных. При этом в трансформированных клетках, обработанных бутиратом натрия, уменьшается способность к репарации двунитевых разрывов ДНК по механизмам негомологичного соединения концов и эксцизионной репарации нуклеотидов; в нормальных клетках снижения репаративной способности не происходит. Бутират натрия не влияет на репарацию двунитевых разрывов ДНК по механизму гомологичной рекомбинации как в трансформированных, так и в нормальных клетках. Предполагаемое объяснение такого различия состоит в том, что механизмы NHEJ и NER работают преимущественно в фазе G1, в то время работа HR показана в фазе G2, в которую клетки, остановившиеся в цикле в точке G1/S под действием NaBut, не попадают. В трансформированных клетках, но не в нормальных происходит подавление экспрессии некоторых генов, кодирующих белки репарации ДНК (Ku70, Ku80, mre11, RPA-32) под действием бутирата натрия, что и является возможной причиной подавления процессов репарации ингибитором HDAC. Данная особенность позволяет рассматривать бутират натрия как перспективный агент противоопухолевой терапии.
Направление: Биология
Кафедра: Цитологии и гистологии
Научный руководитель: к.б.н. Иготти М.В.
Отзыв научного руководителя
Рецензент: к.б.н. Цимоха А.С.
Рецензия
Дата защиты: 10-06-2015
|
