Сынчикова Анна Павловна

Квалификационная работа магистра: "Особенности иммунного статуса пуповинной крови человека при вирусологическом повреждении"

Работа выполнена в Центре клеточной и генной терапии Покровского банка стволовых клеток Целью проведенного исследования была разработка и адаптация методов оценки иммунного статуса для пуповинной крови человека, в том числе, на фоне вирусологического повреждения при цитомегаловирусной инфекции. Для реализации этих целей были поставлены следующие задачи:

1. Адаптировать протоколы проведения анализа на иммунный статус для пуповинной крови с использованием проточной цитофлюорометрии.

2. Оценить распространенность ЦМВИ с применением метода иммуноферментного анализа.

3. Сравнить параметры иммунного статуса пуповинной крови в группе здоровых доноров и у лиц, инфицированных цитомегаловирусом.

Актуальность. Цитомегаловирус (ЦМВ) - один из представителей герпетических вирусов является возбудителем заболеваний, характеризующихся полиморфной симптоматикой и вариабильностью течения. ЦМВИ встречается повсеместно и в любом возрасте. В разных странах уровень серопозитивных лиц к ЦМВИ колеблется в пределах 25-95%. Для Северо-Западного региона оценка распространенности данного заболевания по данным литературе колеблется с пределах 60-70%. Данный показатель имеет важное прогностическое значение для общественного здоровья, т.к. уровень серопозитивности среди населения зависит от социального статуса, уровня материального благополучия и сексуальной активности. На этом фоне особую актуальность приобретают исследования, направленные на изучение распространенности ЦМВ у новорожденных детей. Следует отметить, что на сегодняшний день отсутствуют пределы нормы показателей основных популяций иммунокомпетентных клеток пуповинной крови не только для Северо-Западного региона, но также не выработаны общероссийские нормативные показатели. Очень важным разделом для биологии и медицины при появлении новых методик исследования является формирование нормативных показателей. Работа послужила началом для накопления данных в этой области исследований. Ценность проведенного исследования заключается в том, что работы по оценке иммунного статуса пуповинной крови на фоне вирусологического повреждения ранее не проводились.

Материалы и методы. Работа проводилась на 41 образце пуповинной крови доношенных новорожденных, у которых внутриутробное развитие и роды протекали физиологически. Каждый образец тестировался методом ИФА на наличие антител класса G к ЦМВ. Методом проточной лазерной цитофлюорометрии для каждого образца определялись следующие параметры общего иммунного статуса: абсолютное и относительное содержание различных популяций лимфоцитов, в том числе CD3+ Т-лимфоцитов (с определения числа Т-хелперов, Т-киллеров и активированных Т-клеток – CD3+HLA-DR+), CD19+ В-лимфоцитов и натуральных киллеров (CD3-CD16+CD56+). Дизайн исследования – поперечный (cross sectional)

Результаты. По результатам иммуноферментного анализа, направленного на выявление в сыворотке крове антител класса G к цитомегаловирусу, было показано, что превалентность цитомегаловирусной инфекции составляет 85%. Следует отметить, что данную выборку составляли женщины детородного периода с высоким уровнем материального благополучия, соответственно показатели превалентности в этой группе ниже, чем для популяции в целом. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов пуповинной крови при помощи проточной цитометрии показало, что большинство исследуемых параметров у новорожденных, обладающих антителами к ЦМВ, находилось в пределах значений, полученных для условно здоровых доноров. Однако на фоне ЦМВИ была отмечена тенденция к снижению абсолютного и относительного числа натуральных киллерных клеток, а также к повышению абсолютного и относительного количества B-клеток.

Выводы:

1. В ходе работы была проведена разработка и адаптация протокола проведения анализа иммунного статуса для пуповинной крови с использованием метода проточной лазерной цитофлюорометрии.

2. Распространенность антител CMV IgG среди новорожденных детей Санкт-Петербурга составила 85%, что превышает существующие в литературе показатели.

3. Достоверных различий по исследованным параметрам иммунного статуса пуповинной крови при вирусологическом повреждении ЦМВИ по сравнению со здоровыми донорами выявлено не было.

Научный руководитель: д.м.н. А.Б.Смолянинов

Направление: Биология

Специализация «Эпидемиология» магистерской программы «Общественное здоровье».

Дата защиты: 21-06-2011